qPCR-SYBR-Green mix/ROX, Frasco para 200 reações, mod.: MIX-qPCR (Ludwig)

MARCA: LUDWIG - MODELO: MIX-qPCR - PRODUTO qPCR-SYBR-Green mix/ROX, Frasco para 200 reações.

APLICAÇÃO: O qPCR-SYBR-Green mix é uma mistura reacional que contém praticamente a totalidade dos componentes necessários para uma reação de PCR quantitativa em Tempo Real (qPCR). As concentrações do fluoróforo SYBR-Green, dNTP e de magnésio foram otimizadas para a obtenção do máximo de sensibilidade, amplificação e especificidade nas condições de PCR. Cabe ao usuário, adicionar ao qPCR-SYBR-Green mix uma combinação de oligonucleotídeos específicos e a amostra contendo as moléculas de DNA ou cDNA a ser amplificado, em volume final equivalente ao qPCR-SYBR-Green mix.

COMPOSIÇÃO DO qPCR-SYBR-Green mix:

Em sua formulação, o qPCR-SYBR-Green mix é formado de:

(i) DNA polimerase termo-resistente (HS-Taq DNA pol) cuja atividade é iniciada somente após incubação por 5 min a 94ºC;

(ii) Concentração otimizada do fluoróforo SYBR-Green;

(iii) Mistura de dNTPs;

(iv) Concentração otimizada de MgCl2;

(v) ROX, um fluoróforo de referência;

(vi) Criopreservantes.

SUGESTÃO DE USO:

O qPCR-SYBR-Green mix deve ser misturado com uma proporção equivalente (volume a volume) de uma combinação de oligonucleotídeos específicos e da amostra contendo as moléculas de DNA ou cDNA a serem amplificados. Apesar da presença do fluoróforo de referência ROX, que minimiza os efeitos de evaporação e condensação, é sugerido que a reação de qPCR seja realizada em um volume não inferior a 20 μl.

Exemplo de reação para 24 μl:

qPCR-SYBR-Green mix 12 μl;

Conjunto de oligonucleotídeos 2 μl;

Amostra de DNA ou cDNA 10 μl;

Volume final 24 μl.

COMPATIBILIDADE:

O qPCR-SYBR-Green mix é compatível com todos os equipamentos de PCR em Tempo Real com excitação na faixa de 495 nm e detector na faixa de 520 nm, ou seja compatíveis com o fluoróforo intercalante de DNA SYBR-Green e seus análogos.

CONTROLE DE QUALIDADE:

Cada lote de produção do qPCR-SYBR-Green mix é testado com relação a qualidade e integralidade de seus componentes. Uma curva padrão de amplificação é realizada para garantir a linearidade, determinar a faixa de sensibilidade da detecção e garantir uma homogeneidade entre os lotes produzidos. Neste kit, são fornecidos três tubos contendo uma mistura de oligonucleotídeos com DNA padrão (P1, P32 e P1024), a fim de permitir que o usuário possa conferir a atividade do mix reacional em seu laboratório e com seu equipamento.

OBSERVAÇÕES GERAIS:

Qualquer metodologia analítica baseada no uso de kits reagentes necessita de uma

calibração ou realização de curvas padrões. Asseguramos que o qPCR-SYBRGreen

mix da Ludwig Biotec apresenta uma sensibilidade e eficiência equivalente a outros produtos existentes no mercado. Entretanto, em uma análise comparativa poderão ocorrer variações quanto a Tm dos produtos amplificados e na intensidade de fluorescência na parte de saturação da curva de amplificação.

É importante ressaltar que a qualidade do sinal na parte inicial da amplificação

exponencial e a eficiência de amplificação obtida é dependente e irá variar

conforme a combinação de oligonucleotídeos utilizada e do molde de DNA ou

cDNA).

ARMAZENAMENTO: A fim de garantir a estabilidade e a qualidade, guarde o qPCR-SYBRGreen mix sempre a –20ºC. Mantenha o qPCR-SYBR-Green mix protegido da exposição direta da luz. Este cuidado é recomendado pois quando o SYBR Green fica exposto a luz intensa, observa-se uma redução do sinal de emissão da fluorescência que poderá também resultar numa redução e alteração na sensibilidade da reação.

APRESENTAÇÃO/EMBALAGEM: qPCR SYBR Green mix 2 x 1.250 μl (para 200 reações de 24 μl). MgCl2 1,25 ml